截至9月18日，影片731首映日预售场次突破23.6万场，创下中国影史上映首日排片新纪录，超越此前由速度与激情9和复仇者联盟4：终局之战共同保持的22.8万场纪录，登顶首映日场次冠军。

该片预售总票房已于9月17日晚间突破1亿元，成为今年春节档之后首部预售票房破亿的影片，且未包含任何点映场次。根据专业票房预测模型显示，731首日票房预计可达2.11亿元。

影片背景设定于1945年抗战胜利前夕，聚焦侵华日军第七三一部队在哈尔滨平房区的秘密基地。该部队以“给水防疫”为伪装，长期进行细菌武器研发，并大规模抓捕平民实施活体实验，企图通过惨无人道的手段扭转战局。

故事围绕小贩王永章等普通百姓展开，他们被强行关押进所谓“特设监狱”，在日军编造的“配合防疫检查即可获释”的谎言下，被迫承受冻伤、毒气及活体解剖等非人实验。影片以平民视角切入，真实还原那段黑暗历史，揭露战争暴行对人类良知的践踏。

在极端压迫之下，角色展现出顽强的意志与不屈的抗争精神，传递出对生命尊严的坚守。作品意在唤起公众对历史的记忆，警示后人勿忘民族苦难，珍视和平，捍卫正义。